Śmierć księżnej Diany, którą nazywano królową ludzkich serc, była ogromnym ciosem dla milionów ludzi. Nie tylko Brytyjczycy pokochali Lady Di za skromność i dobre serce, księżna cieszyła się wyjątkową sympatią na całym świecie. Była znana głównie z działalności dobroczynnej i charytatywnej, czym zaskarbiła sobie miłość opinii publicznej.
Do wypadku, w którym zginęła Lady Di, doszło dokładnie 31 sierpnia 1997 o godz. 0:24 w Paryżu. Samochód wiozący Dianę uderzył w trzynasty filar paryskiego tunelu Alma. Na miejscu zginęli kierowca mercedesa Henri Paul oraz ówczesny partner księżnej Diany, Dodi Al-Fayed . Diana i ochroniarz Dodiego, Trevor Rees-Jones doznali ciężkich obrażeń i o ich życie walczyli lekarze ze szpitala La Pitié-Salpêtriére. Niestety, pomimo usilnych starań medyków, księżna Diana nie przeżyła wypadku. Wewnętrzne obrażenia okazały się zbyt rozległe i Lady Di zmarła po kliku godzinach. W chwili śmierci miała zaledwie 36 lat i osierociła dwóch synów: Williama i Harrego.
Jedynym ocalałym z potwornego wypadku okazał się ochroniarz Trevor Rees-Jones. Początkowo myślano, że także księżna Diana nie doznała poważniejszych obrażeń. Chwilę po zderzeniu była przytomna i nawet wypowiedziała kilka zdań. Według zeznań światków powtarzała kilkukrotnie słowa „O mój Boże”, a także zwracał się do otaczających ją paparazzich, by zostawili ją w spokoju. Za śmierć królowej ludzkich serc obwiniono właśnie paparazzi, którzy nieustanie śledzili każdy krok Diany.
Pogrzeb księżnej Walii odbył się 6 września 1997 roku w opactwie westminsterskim i był wyjątkowym hołdem złożonym królowej ludzkich serc. Na trasie przejazdu trumny z ciałem Lady Di do rodzinnej posiadłości Spencerów w Northamptonshire pojawiło się ponad milion ludzi. Do tego telewizyjną transmisję z pogrzebu oglądało 2,5 miliarda osób na całym świecie.
Uroczystości pogrzebowe rozpoczęły się punktualnie o godzinie 11, a mowę pogrzebową wygłosił brat zmarłej, Charles Spencer. Oprócz najbliżej rodziny w ostatnim pożegnaniu Diany uczestniczyło mnóstwo znanych osobistości, m.in.: Margaret Thatcher, Sting, Tom Cruise, Nicole Kidman, Tom Hanks, Steven Spielberg , George Michael, Luciano Pavarotti, Diana Ross, Cindy Crawford, Chris de Burgh, Valentino, Karl Lagerfeld oraz Donatella Versace, a także Elton John. Ten ostatni w hołdzie dla swojej przyjaciółki wykonał przekształconą wersję piosenki „Candle in the Wind”.
Za trumną Lady Di szli: były mąż książę Karol , były teść książę Edynburga Filip, brat Charles Spencer oraz synowie William i Harry. Ten ostatni na trumnie ułożył kartkę podpisaną „Mamusia”.
Księżna Diana została pochowana na wyspie Althorp, na terenie rodzinnej posiadłości Spencerów, gdzie spędziła dzieciństwo. Wyspa w całości została poświęcona zmarłej księżnej Walii. Rosną tam ulubione kwiaty Lady Di, a posadzone 36 drzew symbolizuje każdy rok życia Diany.
Na temat śmierci księżnej Diany co roku pojawiają się nowe teorie i domysły. Niektórzy nie wierzą w przypadkowy wypadek i przekonują, że Lady Di została zamordowana. W 2017 roku wybuchło niemałe zamieszanie, gdy emerytowany agent MI5 przyznał się do zamordowania księżnej Diany. John Hopkins miał tego dokonać na zlecenie rodziny królewskiej.
W marcu 2020 roku spekulacje o nieprzypadkowej śmierci księżnej Diany odżyły na nowo za sprawą informacji opublikowanych przez grupę Anonymous. Jak twierdzą, są oni w posiadaniu dokumentów, według których to Elżbieta II i książę Filip odpowiadają za zabójstwo Diany.